Plasmide CRISPR d'Activation (h) galectin-1: sc-400941-ACT

LGALS1 code la galectine-1 humaine, une lectine se liant aux β-galactosides qui régule les interactions cellule–cellule et cellule–matrice en se fixant à des récepteurs glycosylés à la surface cellulaire et dans la matrice extracellulaire. La galectine-1 influence l’adhésion médiée par les intégrines, la signalisation des cellules immunitaires et les réponses au stress, et peut moduler l’apoptose, la migration et les programmes angiogéniques de manière dépendante du contexte. Par ses effets sur l’agrégation (clustering) et la signalisation de récepteurs dépendantes des glycannes, la galectine-1 impacte des voies liées à l’inflammation, au dialogue tumeur–stroma et au remodelage tissulaire. Une expression dérégulée de LGALS1 a été associée à des phénotypes d’échappement immunitaire, à des processus fibrosants et à la progression de plusieurs types de cancer, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour des recherches centrées sur le microenvironnement.

galectin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LGALS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

galectin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LGALS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LGALS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de galectin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LGALS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de galectin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie galectin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LGALS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.