Gads CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421689

Übersicht

Grap2 kodiert das Adapterprotein Gads, eine hämatopoetische Signalkomponente, die aktivierte Immunrezeptoren mit nachgeschalteten Effektorwegen verknüpft. In T‑Zellen koppelt Gads phosphoryliertes LAT an SLP‑76, um Signalmikrocluster zu bilden, die die proximale T‑Zellrezeptor‑Signalübertragung weiterleiten und dadurch die Aktivierung von PLCγ1, den Kalziumfluss, die MAPK‑Signalgebung sowie Transkriptionsprogramme fördern, die die Zytokinproduktion und Proliferation steuern. Dieser Adapter ist zudem an der Signalübertragung weiterer Immunrezeptoren in lymphoiden Zelllinien beteiligt und beeinflusst dabei Aktivierungsschwellen von Zellen sowie die Organisation der immunologischen Synapse. Fehlregulierte, Gads‑abhängige Signalnetzwerke werden häufig in Modellen für Immunfunktionsstörungen, inflammatorische Phänotypen und hämatopoetische Signalgebungsanomalien untersucht.

Das Gads CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Grap2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Grap2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Grap2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Gads-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Grap2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Gads-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Grap2-Exone abzielen, die für die Gads-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Grap2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Gads CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Gads CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Grap2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Gads HDR-Plasmid (m) und Gads HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Grap2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Grap2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.