GAD-67 Double Nickase Plasmid (h): sc-400588-NIC

Das humane **GAD1**-Gen kodiert die Glutamatdecarboxylase 67 (**GAD-67**), ein zentrales zytosolisches Enzym, das die Umwandlung von Glutamat zu γ-Aminobuttersäure (**GABA**) katalysiert und damit die inhibitorische Neurotransmission im zentralen Nervensystem aufrechterhält. GAD-67 unterstützt die basale GABA-Produktion und beeinflusst über die Regulation intrazellulärer Neurotransmitterpools das synaptische Gleichgewicht, die neuronale Erregbarkeit sowie aktivitätsabhängige Plastizität. Veränderte Expression oder Regulation von GAD1/GAD-67 wurde mit einer gestörten Homöostase von Erregung und Hemmung in Verbindung gebracht und im Kontext neuroentwicklungsbedingter und neuropsychiatrischer Störungen untersucht, darunter Schizophrenie, Autismus-Spektrum-Störung und epilepsieassoziierte Phänotypen. Als Marker und funktioneller Determinant der Identität GABAerger Neurone wird GAD-67 häufig genutzt, um die Entstehung und Reifung inhibitorischer Schaltkreise sowie stressresponsive Veränderungen des Neurotransmitterstoffwechsels zu untersuchen.

GAD-67 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GAD1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GAD1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GAD1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GAD1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.