GAD-67 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400588-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GAD-67O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase GAD-67 (h) e o Plasmídeo Double Nickase GAD-67 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GAD1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GAD-67 Anticorpo (F-6): sc-28376
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GAD-67 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400588-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GAD-67 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400588-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O GAD1 humano codifica a descarboxilase do glutamato 67 (GAD-67), uma enzima citosólica essencial que catalisa a conversão de glutamato em ácido γ-aminobutírico (GABA), sustentando a neurotransmissão inibitória no sistema nervoso central. A GAD-67 mantém a produção basal de GABA e influencia o equilíbrio sináptico, a excitabilidade neuronal e a plasticidade dependente de atividade por meio da regulação dos reservatórios intracelulares de neurotransmissores. Alterações na expressão ou na regulação de GAD1/GAD-67 têm sido associadas a uma homeostase excitação–inibição desorganizada e foram estudadas no contexto de perturbações do neurodesenvolvimento e de transtornos neuropsiquiátricos, incluindo esquizofrenia, transtorno do espectro do autismo e fenótipos relacionados à epilepsia. Como marcador e determinante funcional da identidade de neurônios GABAérgicos, a GAD-67 é comumente utilizada para investigar a formação e a maturação de circuitos inibitórios, bem como o metabolismo de neurotransmissores responsivo ao estresse.
GAD-67 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GAD1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GAD1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GAD1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GAD1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.