Plasmide Double Nickase (h) GABP-β1/2: sc-404040-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GABP-β1/2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GABP-β1/2 Double Nickase (h) et le plasmide GABP-β1/2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GABPB1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GABP-β1/2 Antibody (E-7): sc-271571
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GABP-β1/2 | sc-404040-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GABP-β1/2 | sc-404040-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La sous-unité bêta 1 de la protéine de liaison GA (GABPB1) code le partenaire β1/β2 qui s’hétérodimérise avec GABPA pour former le facteur de transcription GABP de la famille ETS, lequel se lie à des éléments promoteurs riches en GA et coordonne des programmes d’expression génique contrôlant la progression du cycle cellulaire, la biogenèse mitochondriale et la protéostasie. Les complexes GABP régulent des gènes mitochondriaux codés par le noyau ainsi que la capacité de phosphorylation oxydative, et ils contribuent au contrôle transcriptionnel du maintien des télomères via la régulation du promoteur de TERT. Par ces fonctions, GABPB1 s’inscrit à l’interface de voies qui gouvernent le métabolisme cellulaire, l’adaptation au stress et des réseaux transcriptionnels spécifiques de lignée. Un dérèglement de la signalisation GABP et une altération de la production transcriptionnelle dépendante de GABPB1 ont été impliqués dans des contextes de biologie tumorale et de troubles associés à des dysfonctions mitochondriales ou à des défauts de contrôle transcriptionnel, ce qui soutient des études mécanistiques de la régulation des gènes et de la fitness cellulaire.
GABP-β1/2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GABPB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GABPB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GABPB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GABPB1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.