GABA_A Rγ2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402057-ACT

GABRG2 kodiert die γ2‑Untereinheit des menschlichen GABA\(_A\)-Rezeptors, eines ligandengesteuerten Chloridkanals, der die schnelle inhibitorische Neurotransmission im zentralen Nervensystem vermittelt. Der Einbau von γ2 ist entscheidend für den Zusammenbau des Rezeptors, die synaptische Zielsteuerung und die Modulation durch Liganden an der Benzodiazepin-Bindestelle und prägt damit die neuronale Erregbarkeit und Netzwerkoszillationen. Die Signalübertragung über GABA\(_A\)-Rezeptoren beeinflusst die Membranpolarisation, die Schwellenwerte für die Auslösung von Aktionspotenzialen und die aktivitätsabhängige synaptische Plastizität in vielfältigen neuronalen Schaltkreisen. Genetische und funktionelle Störungen von GABRG2 wurden mit neuroentwicklungsbezogenen und anfallsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, weshalb es ein breit untersuchter Bestandteil der Biologie inhibitorischer Synapsen ist.

GABAA Rγ2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GABRG2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GABAA Rγ2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GABRG2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GABRG2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GABAA Rγ2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GABRG2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GABAA Rγ2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GABAA Rγ2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GABRG2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.