Plasmide CRISPR d'Activation (h) GABA_A Rδ: sc-401954-ACT

GABRD code la sous-unité δ du récepteur humain GABA\_A, un canal chlorure ligand‑dépendant qui assure une neurotransmission inhibitrice tonique dans le système nerveux central. L’incorporation de la sous-unité δ dans des complexes récepteurs extrasynaptiques confère une forte sensibilité au GABA ambiant et contribue à une conductance chlorure soutenue, modulant l’excitabilité neuronale et les oscillations des réseaux. En régulant le tonus inhibiteur, la signalisation du récepteur GABA\_A δ s’articule avec la plasticité synaptique, la modulation par les neurostéroïdes en réponse au stress et l’équilibre excitation–inhibition. Des travaux de recherche ont associé une expression altérée de GABRD ou une composition récepteur modifiée à des phénotypes neuropsychiatriques et neurologiques impliquant une inhibition perturbée, notamment une susceptibilité aux crises et des endophénotypes liés à l’humeur.

GABAA Rδ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GABRD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GABAA Rδ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GABRD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GABRD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GABAA Rδ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GABRD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GABAA Rδ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GABAA Rδ dans les cellules tumorales présentant une expression de GABRD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.