Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GABAA Rβ3 Double Nickase Plasmid (h): sc-403007-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GABAA Rβ3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GABAA Rβ3 Double-Nickase-Plasmid (h) und GABAA Rβ3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GABRB3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GABAA Rβ3: sc-376252
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GABAA Rβ3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403007-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GABAA Rβ3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403007-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GABRB3 kodiert die menschliche β3‑Untereinheit des GABA\_A‑Rezeptors, einen zentralen Bestandteil ligandengesteuerter Chloridkanäle, die die schnelle inhibitorische Neurotransmission im zentralen Nervensystem vermitteln. Der Einbau von β3 beeinflusst die Assemblierung des Rezeptors, den Transport zur Zelloberfläche und pharmakologische Eigenschaften und prägt so die neuronale Erregbarkeit über synaptische und extrasynaptische GABAerge Signalübertragung. Die Aktivität von GABA\_A‑Rezeptoren ist mit der Regulation des Membranpotenzials und Netzwerkoszillationen gekoppelt und wirkt nachgeschaltet auf Synapsenreifung und aktivitätsabhängige Plastizität. Genetische Variation oder eine dysregulierte Expression von GABRB3 wurde mit neuroentwicklungsbezogenen und anfallsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was den Einsatz in mechanistischen Studien zur Dysfunktion inhibitorischer Schaltkreise unterstützt.
GABAA Rβ3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GABRB3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GABRB3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GABRB3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GABRB3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.