Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) GABAA Rα5: sc-402696-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GABAA Rα5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GABAA Rα5 (h) y el plásmido de doble nickasa GABAA Rα5 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GABRA5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GABAA Rα5 Anticuerpo (A-5): sc-393921
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GABAA Rα5 | sc-402696-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GABAA Rα5 | sc-402696-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GABRA5 codifica la subunidad α5 del receptor humano GABA\_A, un canal de cloruro activado por ligando que media la neurotransmisión inhibitoria en el sistema nervioso central. Los receptores que contienen α5 están enriquecidos en sitios extrasinápticos y contribuyen a la inhibición tónica, modulando la excitabilidad neuronal, la integración sináptica y la plasticidad a través de la homeostasis del cloruro y la señalización GABAérgica. Esta subunidad participa en la regulación de redes dependiente de la actividad e interactúa funcionalmente con vías que gobiernan los circuitos de aprendizaje y memoria. La desregulación de la señalización del receptor GABA\_A que contiene α5 se ha asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la función de los circuitos inhibitorios.
GABAA Rα5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GABRA5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GABRA5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GABRA5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GABRA5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.