GABA T-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403545

Übersicht

SLC6A11 kodiert den GABA-Transporter 3 (GABA T-3), einen Na⁺/Cl⁻-abhängigen Solute Carrier, der die hochaffine Wiederaufnahme von γ-Aminobuttersäure (GABA) aus dem extrazellulären Raum vermittelt und so die inhibitorische Neurotransmission reguliert. Durch die Kontrolle der synaptischen und extrasynaptischen GABA-Verfügbarkeit beeinflusst GABA T-3 die neuronale Erregbarkeit, die tonische Inhibition und die allgemeine Homöostase GABAerger Schaltkreise. Dieser Transporter ist an Prozessen des Neurotransmittertransports und des ionengekoppelten Membrantransports beteiligt, die mit dem Glutamat–GABA-Stoffwechselgleichgewicht und der Oszillationsaktivität auf Netzwerkebene zusammenhängen. Eine gestörte GABA-Clearance und veränderte SLC6A11-Expression wurden im Kontext neuropsychiatrischer und neurologischer Phänotypen untersucht, bei denen das Gleichgewicht inhibitorischer Signalübertragung beeinträchtigt ist, und stützen mechanistische Untersuchungen GABAerger Dysfunktionen.

Das GABA T-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC6A11-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC6A11-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC6A11 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GABA T-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC6A11-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GABA T-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC6A11-Exone abzielen, die für die GABA T-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC6A11-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GABA T-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GABA T-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC6A11-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GABA T-3 HDR-Plasmid (h) und GABA T-3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC6A11-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC6A11-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.