GABA T-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-411007

Übersicht

SLC6A1 kodiert den menschlichen GABA-Transporter 1 (GABA T-1), einen hochaffinen, Na+/Cl−-abhängigen Transporter in der Plasmamembran, der γ-Aminobuttersäure (GABA) aus synaptischen und extrasynaptischen Räumen entfernt und dadurch die inhibitorische Neurotransmission formt. Durch die Regulation der GABA-Wiederaufnahme beeinflusst GABA T-1 die neuronale Erregbarkeit, die zeitliche Abstimmung synaptischer Signale und Netzwerkoszillationen und verknüpft die Transporteraktivität mit dem Neurotransmitter-Recycling und ionengekoppelten Transportprozessen. Eine Funktionsstörung von SLC6A1 ist mit neuroentwicklungsbezogenen und epilepsieassoziierten Phänotypen verbunden; eine veränderte GABA-Homöostase wurde zudem mit breiteren Mechanismen eines Ungleichgewichts kortikaler Schaltkreise in Zusammenhang gebracht. Die experimentelle Beeinflussung von SLC6A1 unterstützt Studien auf Signalwegebene zu inhibitorischer Signalübertragung, Dynamiken der Rezeptoraktivierung und Komensation durch verwandte Solute-Carrier-Transporter.

Das GABA T-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC6A1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC6A1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC6A1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GABA T-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC6A1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GABA T-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC6A1-Exone abzielen, die für die GABA T-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC6A1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GABA T-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GABA T-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC6A1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GABA T-1 HDR-Plasmid (h) und GABA T-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC6A1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC6A1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.