Plasmide CRISPR d'Activation (h) G9a: sc-402484-ACT

EHMT2 code la méthyltransférase humaine des lysines des histones G9a, principal « writer » des marques H3K9me1/2, qui favorisent l’hétérochromatine facultative et la répression transcriptionnelle. G9a coopère avec GLP, les protéines HP1 et la machinerie de méthylation de l’ADN pour moduler l’accessibilité de la chromatine et stabiliser des programmes d’expression génique spécifiques de lignée au cours du développement et de la différenciation. En régulant le contrôle du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et des réseaux transcriptionnels métaboliques et inflammatoires, EHMT2 influence de multiples voies de signalisation liées à l’homéostasie épigénétique. Une activité dérégulée de G9a et des profils altérés de méthylation de H3K9 ont été associés à la biologie tumorale, à des phénotypes neurodéveloppementaux et à un remodelage transcriptionnel lié à l’immunité, ce qui souligne sa pertinence pour la modélisation mécanistique des maladies.

G9a Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EHMT2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

G9a Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EHMT2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EHMT2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de G9a. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EHMT2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de G9a au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie G9a dans les cellules tumorales présentant une expression de EHMT2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.