Plásmido CRISPR de Activación (h2) FXYD3: sc-406431-ACT-2

El FXYD3 humano codifica un pequeño regulador de membrana de paso único de la Na⁺/K⁺-ATPasa, que modula la cinética de la bomba y, de este modo, influye en la homeostasis iónica celular, el potencial de membrana y la regulación del volumen en contextos epiteliales. A través de su control del transporte de sodio y potasio, FXYD3 afecta procesos posteriores vinculados a la proliferación, la diferenciación y la adaptación al estrés, que se entrecruzan con redes de señalización sensibles al equilibrio iónico. Se han descrito alteraciones en la expresión de FXYD3 en múltiples carcinomas y otras patologías epiteliales, lo que respalda su relevancia para el estudio de una biología del transporte desregulada y de cambios metabólicos y del microambiente asociados a tumores. La edición génica o la perturbación de FXYD3 permite investigar mecanismos de regulación de la Na⁺/K⁺-ATPasa, la proteostasis de membrana y fenotipos dependientes de iones en modelos de células humanas, incluyendo ensayos funcionales de actividad de la bomba, migración y propiedades de barrera epitelial.

FXYD3 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FXYD3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FXYD3 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FXYD3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FXYD3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FXYD3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FXYD3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FXYD3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FXYD3 en células tumorales con expresión de FXYD3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.