Furin Lentiviral Activation Particles (h): sc-400904-LAC

FURIN kodiert Furin, eine calciumabhängige Proprotein-Konvertase, die zwischen dem trans-Golgi-Netzwerk und endosomalen Kompartimenten zirkuliert, um auf proteolytischem Weg verschiedenste Vorläuferproteine zu aktivieren, die paarige basische Motive tragen. Durch die Regulation der Reifung von Wachstumsfaktoren, Rezeptoren, Adhäsionsmolekülen und Proteasen prägt Furin die Homöostase sekretorischer und membranständiger Proteine und beeinflusst Signalwege, die mit dem Umbau der extrazellulären Matrix, der Immun-Signalgebung und der zellulären Differenzierung verknüpft sind. Eine dysregulierte FURIN-Aktivität wurde mit veränderter Proteostase und einer fehlerhaften Prozessierung von Signalkomponenten in Kontexten wie Krebsbiologie, Entzündung und der Forschung zu Infektionskrankheiten in Verbindung gebracht. Als zentraler Knotenpunkt der Proprotein-Prozessierung bietet FURIN einen mechanistischen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie die Spaltung von Vorläufern die Zusammensetzung der Zelloberfläche und nachgeschaltete Signalausgänge steuert.

Furin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente FURIN-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Furin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der FURIN-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Furin-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen FURIN-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.