Furin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400904-ACT

FURIN kodiert Furin, eine calciumabhängige Proprotein-Konvertase, die im sekretorischen Weg vielfältige Vorläuferproteine spaltet und aktiviert, darunter Hormone, Wachstumsfaktoren, Rezeptoren und matrixmodifizierende Enzyme. Durch die Prozessierung von Substraten im trans-Golgi-Netzwerk, in Endosomen und an der Zelloberfläche beeinflusst Furin Signalwege, die Zellkommunikation, Differenzierung, Umbau der extrazellulären Matrix und regulierte Sekretion steuern. Eine fehlregulierte FURIN-Aktivität wurde mit veränderter Proteostase und einer aberranten Aktivierung von Signalachsen in Verbindung gebracht, die für Krebsbiologie, Entzündungsprozesse und Mechanismen infektiöser Erkrankungen relevant sind. Als zentraler Knotenpunkt der Proproteinreifung wird Furin häufig untersucht, um seinen Einfluss auf die Verfügbarkeit von Rezeptor-Ligand-Interaktionen und die Stärke nachgeschalteter Signalwege in humanen Zellmodellen zu verstehen.

Furin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FURIN-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Furin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FURIN-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FURIN-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Furin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FURIN-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Furin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Furin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FURIN-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.