Plásmido CRISPR de Activación (h) Furin: sc-400904-ACT

FURIN codifica furina, una convertasa de proproteínas dependiente de calcio que escinde y activa diversos precursores proteicos dentro de la vía secretora, incluidas hormonas, factores de crecimiento, receptores y enzimas que modifican la matriz extracelular. Al procesar sustratos en la red trans-Golgi, los endosomas y en la superficie celular, la furina influye en vías que regulan la señalización celular, la diferenciación, la remodelación de la matriz extracelular y la secreción regulada. La actividad desregulada de FURIN se ha asociado con alteraciones en la proteostasis y con la activación aberrante de ejes de señalización implicados en la biología del cáncer, la inflamación y los mecanismos de enfermedades infecciosas. Como nodo central en la maduración de proproteínas, la furina se estudia con frecuencia por su impacto en la disponibilidad receptor-ligando y en la magnitud de las vías downstream en modelos de células humanas.

Furin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FURIN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Furin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FURIN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FURIN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Furin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FURIN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Furin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Furin en células tumorales con expresión de FURIN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.