Plasmide CRISPR d'Activation (h) FUNDC1: sc-403031-ACT

FUNDC1 (FUN14 domain containing 1) code un récepteur de la membrane externe mitochondriale qui régule la mitophagie en réponse à l’hypoxie et au stress. En se liant à LC3 via son motif LIR et grâce à une régulation dépendante de la phosphorylation, FUNDC1 contribue à coordonner le contrôle qualité des mitochondries, le renouvellement des organites et l’adaptation bioénergétique, en intégrant des signaux issus de la dynamique mitochondriale et des voies du stress oxydant. Des altérations de l’activité de FUNDC1 ont été associées à une mitophagie dérégulée et à un dysfonctionnement mitochondrial, des processus pertinents pour la neurodégénérescence, des modèles de lésions cellulaires liées à l’ischémie et des mécanismes de maladies métaboliques.

FUNDC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FUNDC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FUNDC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FUNDC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FUNDC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FUNDC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FUNDC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FUNDC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FUNDC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FUNDC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.