FucT-VI Double Nickase Plasmid (h): sc-409615-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FucT-VI Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FucT-VI Double-Nickase-Plasmid (h) und FucT-VI Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FUT6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FucT-VI Double Nickase Plasmid (h) | sc-409615-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FucT-VI Double Nickase Plasmid (h2) | sc-409615-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FUT6 kodiert die α(1,3)-Fucosyltransferase VI (FucT‑VI), eine im Golgi-Apparat lokalisierte Glykosyltransferase, die Fucose von GDP‑Fucose auf N‑Acetyllactosamin‑Akzeptoren überträgt und dadurch Lewis‑X‑artige, fucosylierte Glykane erzeugt. Durch die Ausprägung terminaler Fucosylierungsmuster auf Glykoproteinen und Glykolipiden trägt FucT‑VI zur glykanabhängigen Zell‑Zell‑Erkennung, zur Leukozytenadhäsion sowie zur Regulation von Eigenschaften von Rezeptoren und sezernierten Proteinen innerhalb der umfassenderen Fucosylierungs- und Glykosylierungsnetzwerke bei. Die FUT6‑Aktivität wird mit der Biosynthese von Selektinliganden und der Modulation entzündlicher Signalgebungskontexte über veränderte Glykanepitope in Verbindung gebracht. Variationen in der FUT6‑Expression oder -Funktion wurden mit Veränderungen der Serum‑Glykosylierungsprofile und krankheitsrelevanten Glykan‑Phänotypen assoziiert, die in der Immunologie, Infektionsbiologie und Onkologie untersucht werden.
FucT-VI Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FUT6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FUT6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FUT6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FUT6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.