FucT-IX CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416354-ACT

FUT9 kodiert die α1,3‑Fucosyltransferase IX (FucT‑IX), eine im Golgi-Apparat lokalisierte Glykosyltransferase, die terminale Fucosylierungsschritte in der Biosynthese von Lewis‑Typ‑Antigenen katalysiert, darunter Lewis X (CD15). Durch die Prägung von Glykanstrukturen auf der Zelloberfläche und in sezernierten Glykanen beeinflusst FucT‑IX glykanabhängige Erkennungsereignisse, die an Zelladhäsion, Migration und Interaktionen von Immunzellen beteiligt sind. Die FUT9‑Aktivität ist in umfassendere Glykosylierungsnetzwerke eingebunden, die Rezeptorsignale, Entwicklungsprogramme und linienspezifische Differenzierung modulieren, insbesondere in neuralen und hämatopoetischen Kontexten. Veränderte Fucosylierungsmuster und eine Dysregulation von FUT9 wurden mit Veränderungen des Tumorzellverhaltens und inflammatorischen Mikroumgebungen in Verbindung gebracht, was FUT9 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Untersuchungen von Glyko‑Epitopen in der Krankheitsbiologie macht.

FucT-IX Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FUT9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FucT-IX Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FUT9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FUT9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FucT-IX-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FUT9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FucT-IX-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FucT-IX-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FUT9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.