Fucokinase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409449

Übersicht

Das humane FUK-Gen kodiert die Fucokinase, eine zytosolische Kinase, die im Fucose-Salvage-Weg L‑Fucose zu Fucose‑1‑phosphat phosphoryliert und damit Substrat für die GDP‑Fucose-Biosynthese bereitstellt. Indem FUK zu den zellulären Pools aktivierter Fucose beiträgt, unterstützt es die Fucosylierung von Glykoproteinen und Glykolipiden – eine Modifikation, die Rezeptorsignale, Zell‑Zell‑Adhäsion und Immunerkennung moduliert. Veränderte Fucose-Metabolik und Fucosylierungsmuster wurden mit fehlregulierter Entzündung, onkogenem Signaling und Veränderungen der Invasivität von Tumorzellen in Verbindung gebracht, wodurch FUK ein relevanter Knotenpunkt für die Untersuchung glykanabhängiger Phänotypen ist. Die funktionelle Analyse von FUK hilft, den metabolischen Fluss durch Nukleotidzucker‑Stoffwechselwege mit der Aktivität von Glycosyltransferasen und den daraus folgenden Veränderungen von membranständigen und sezernierten Glykoproteomen zu verknüpfen.

Das Fucokinase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FUK-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FUK-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FUK nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Fucokinase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FUK-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Fucokinase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FUK-Exone abzielen, die für die Fucokinase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FUK-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Fucokinase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Fucokinase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FUK-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Fucokinase HDR-Plasmid (h) und Fucokinase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FUK-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FUK-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.