Plasmide CRISPR d'Activation (h) FUCA2: sc-405221-ACT

FUCA2 code l’alpha-L-fucosidase 2, une glycosidase lysosomale impliquée dans la dégradation progressive des glycoconjugués fucosylés, notamment les N-glycanes et les glycolipides. En régulant l’élimination de la fucose terminale, FUCA2 contribue au renouvellement des glycannes et influence plus largement des processus cataboliques dépendants du lysosome, en interface avec le contrôle qualité cellulaire et l’homéostasie métabolique. Des altérations de l’activité fucosidasique et des perturbations de l’équilibre de la fucosylation ont été associées à des modifications des interactions cellule–cellule et de la signalisation liée à l’immunité, ce qui rend FUCA2 pertinent pour les études du glycométabolisme et de la biologie lysosomale. Des voies de glycosylation dérégulées sont fréquemment observées dans des troubles complexes, ce qui étaye l’utilisation de FUCA2 comme nœud mécanistique dans des recherches orientées biomarqueurs et de cartographie des voies.

FUCA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FUCA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FUCA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FUCA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FUCA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FUCA2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FUCA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FUCA2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FUCA2 dans les cellules tumorales présentant une expression de FUCA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.