FUCA1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405275-ACT

FUCA1 codifica a α-L-fucosidase 1 lisossomal, uma glicosidase que remove resíduos terminais de fucose de glicanos ligados a N, glicolipídios e glicoproteínas durante o catabolismo de glicanos. Ao sustentar a renovação e a reciclagem dependentes de lisossomos de substratos fucosilados, a FUCA1 contribui para a homeostase da glicosilação celular e para processos mais amplos ligados ao tráfego endo-lisossomal e à proteostase. Alterações na atividade de fucosidase podem perturbar a remodelação de glicanos e os efeitos de sinalização associados a interações célula–célula, inflamação e respostas ao estresse. A FUCA1 também é relevante para patologias hereditárias de armazenamento lisossomal e é frequentemente investigada em modelos que conectam glicosilação aberrante a fenótipos de câncer e neurodegeneração.

FUCA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FUCA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FUCA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FUCA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FUCA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FUCA1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FUCA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FUCA1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FUCA1 em células tumorais com expressão de FUCA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.