FRY Lentiviral Activation Particles (h): sc-404629-LAC

FRY (furry homolog) kodiert ein großes, evolutionär konserviertes, scaffoldartiges Protein, das an der Regulation der Zellpolarität, der Organisation des Zytoskeletts und morphogenetischer Programme beteiligt ist. Es wurde mit einer Hippo-Signalweg-assoziierten Signalübertragung sowie der Koordination phosphorylierungsabhängiger Ereignisse in Verbindung gebracht, die Proliferation, Differenzierung und Gewebearchitektur beeinflussen. In menschlichen Zellen trägt FRY zur Kontrolle der Aktindynamik und der intrazellulären Organisation bei – Prozesse, die während onkogener Transformation und metastatischer Progression häufig umgebaut werden. Eine veränderte FRY-Expression oder Störungen in FRY-zentrierten Netzwerken wurden in Studien zur Tumorbiologie und zu Entwicklungsphänotypen beschrieben, was seine Relevanz für die Untersuchung von Signalwegen in Krankheitsmodellen unterstreicht.

FRY Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente FRY-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

FRY Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der FRY-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen FRY-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen FRY-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.