Plasmide CRISPR d'Activation (h) FRY: sc-404629-ACT

Le gène humain **FRY** code une grande protéine associée aux microtubules, conservée au cours de l’évolution, impliquée dans l’organisation du cytosquelette, la polarité cellulaire et le contrôle de la prolifération. **FRY** a été associé à la signalisation de type Hippo ainsi qu’à des réseaux de kinases qui couplent la dynamique du centrosome et des microtubules à la progression du cycle cellulaire et à la morphogenèse. À travers ces processus, **FRY** est étudié dans des contextes tels que l’organisation épithéliale, le développement neuronal et la migration, où des perturbations de la régulation du cytosquelette peuvent influencer des phénotypes oncogéniques. Des altérations de l’expression ou de la fonction de **FRY** ont été rapportées dans plusieurs jeux de données pertinents pour la maladie, ce qui étaye son utilisation comme cible de recherche pour disséquer les voies qui gouvernent le contrôle de la croissance et l’architecture tissulaire.

FRY Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FRY sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FRY Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FRY dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FRY, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FRY. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FRY natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FRY au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FRY dans les cellules tumorales présentant une expression de FRY silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.