Plasmide CRISPR/Cas9 KO FRP-3 (m): sc-422898

Présentation

Frzb code FRP-3 (également appelée « secreted frizzled-related protein 3 »), un modulateur extracellulaire de la signalisation Wnt qui se lie aux ligands Wnt et peut atténuer l’activation des récepteurs Frizzled. En modulant la transcription canonique dépendante de la β-caténine ainsi que les voies Wnt non canoniques, FRP-3 contribue à la régulation de la mise en place des axes embryonnaires, de la morphogenèse tissulaire et de la différenciation des lignées mésenchymateuses, notamment l’homéostasie osseuse et cartilagineuse. Dans des modèles murins, une activité altérée de FRP-3 a été associée à des changements de la dynamique de formation osseuse et du remodelage de la matrice extracellulaire, des processus fréquemment liés à des anomalies du développement et à des phénotypes dégénératifs. Comme la signalisation Wnt est étroitement couplée aux décisions de destinée cellulaire et au contrôle de la prolifération, Frzb est largement étudié dans des contextes où un déséquilibre de cette voie contribue au remodelage tissulaire associé à l’inflammation et à la biologie tumorale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FRP-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Frzb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Frzb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Frzb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FRP-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Frzb pour l'étude de la signalisation de FRP-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Frzb essentiels à la fonction de FRP-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Frzb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FRP-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FRP-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Frzb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FRP-3 plasmide HDR (m) et le FRP-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Frzb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Frzb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.