FRAS1 Double Nickase Plasmid (h): sc-407225-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FRAS1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FRAS1 Double-Nickase-Plasmid (h) und FRAS1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FRAS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FRAS1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407225-NIC | 20 µg | $410.00 |
FRAS1 kodiert ein extrazellulärmatrix-assoziiertes Protein, das in Basalmembranzonen lokalisiert und während der embryonalen Morphogenese die epithelial-mesenchymale Adhäsion unterstützt. Es ist an der Verankerung und Stabilisierung epithelialer Strukturen beteiligt und beeinflusst über Zell-Matrix-Interaktionen Prozesse wie die Hautintegrität, die kraniofaziale Entwicklung und die Nierenmorphogenese. Störungen von FRAS1 werden mit dem Phänotypspektrum des Fraser-Syndroms und angeborenen Fehlbildungen in Verbindung gebracht, was seine Bedeutung für Entwicklungswege unterstreicht, die die Gewebeorganisation steuern. Als großes Matrixprotein wird FRAS1 häufig im Zusammenhang mit dem Aufbau der Basalmembran, der Ausbildung epithelialer Barrieren und den Mechanismen untersucht, die Entwicklungsfehlbildungen zugrunde liegen.
FRAS1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FRAS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FRAS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FRAS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FRAS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.