Plasmide CRISPR/Cas9 KO FPR2 (m): sc-420405

Présentation

Le récepteur aux peptides formylés 2 (FPR2 ; gène *Fpr2*) est un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) murin qui reconnaît une diversité de ligands chimioattractants et pro-résolutifs, et se couple à la signalisation via Gi pour réguler la chimiotaxie, l’adhésion et l’activation des leucocytes. L’activation de FPR2 module des voies en aval, notamment PI3K/AKT, MAPK/ERK, la mobilisation du calcium dépendante de PLCβ, ainsi que la signalisation associée à la β-arrestine, façonnant la libération de médiateurs inflammatoires et les réponses en espèces réactives de l’oxygène. Par ces programmes, FPR2 contribue à la surveillance immunitaire innée et à la biologie de la résolution, avec une pertinence documentée pour les lésions tissulaires inflammatoires, l’inflammation associée aux infections et les pathologies d’origine immunitaire. Sa signalisation dépendante du contexte en fait une cible utile pour disséquer comment les entrées RCPG reprogramment le comportement des cellules myéloïdes à travers différents microenvironnements inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FPR2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fpr2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fpr2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fpr2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FPR2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fpr2 pour l'étude de la signalisation de FPR2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fpr2 essentiels à la fonction de FPR2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fpr2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FPR2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FPR2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fpr2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FPR2 plasmide HDR (m) et le FPR2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fpr2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fpr2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.