FOXQ1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403650-ACT

Humanes FOXQ1 kodiert einen Forkhead-Box-Transkriptionsfaktor, der die epitheliale Differenzierung, die Festlegung des Zellschicksals sowie Transkriptionsprogramme reguliert, die Proliferation und Motilität steuern. Die FOXQ1-Aktivität ist in epigenetische und entwicklungsbiologische Signalnetzwerke eingebunden, darunter Signalwege im Zusammenhang mit der epithelial–mesenchymalen Transition (EMT) und der Wnt/β-Catenin-assoziierten Genexpression, und prägt dadurch Phänotypen der Zell-Zell-Adhäsion und Migration. Eine dysregulierte FOXQ1-Expression wurde in zahlreichen Tumorkontexten beschrieben und wird häufig im Hinblick auf ihren Zusammenhang mit Invasion, metastasenbezogenen Transkriptionssignaturen und einer veränderten epithelialen Homöostase untersucht. Als nukleäres DNA-bindendes Protein wird FOXQ1 zudem als Marker und mechanistischer Knotenpunkt in Modellen der transkriptionellen Reprogrammierung und Linienplastizität verwendet.

FOXQ1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FOXQ1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FOXQ1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FOXQ1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FOXQ1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FOXQ1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FOXQ1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FOXQ1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FOXQ1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FOXQ1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.