Plásmido CRISPR de Activación (h) FOXM1: sc-416676-ACT

FOXM1 (forkhead box M1) es un factor de transcripción asociado a la proliferación que coordina la progresión del ciclo celular al regular genes necesarios para la transición G1/S y la entrada en mitosis, incluidas vías que controlan la replicación del ADN, el ensamblaje del huso mitótico y la segregación cromosómica. Interactúa con redes reguladoras clave como la señalización CDK–ciclina y los programas de respuesta al daño del ADN para equilibrar la división celular con la integridad del genoma. La expresión aberrante de FOXM1 se observa con frecuencia en firmas transcripcionales relacionadas con oncología y se asocia con crecimiento invasivo, inestabilidad genómica y respuestas alteradas al estrés celular, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudiar la biología tumoral y el control del ciclo celular. Además, FOXM1 contribuye a programas de remodelación tisular al influir en rasgos epitelio–mesenquimales y en respuestas transcripcionales al estrés oxidativo y replicativo.

FOXM1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FOXM1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FOXM1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FOXM1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FOXM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FOXM1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FOXM1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FOXM1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FOXM1 en células tumorales con expresión de FOXM1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.