FOXI1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-420369-LAC

Foxi1 kodiert den Forkhead-Box-Transkriptionsfaktor FOXI1, einen sequenzspezifischen DNA-bindenden Regulator, der Programme der epithelialen Zelllinie und die Differenzierung steuert. In der Maus ist FOXI1 für Ionentransport sowie die Säure-Base-Homöostase essenziell, indem es Transkriptionsnetzwerke in spezialisierten Epithelzellen reguliert, darunter solche, die an der Nieren- und Innenohrphysiologie beteiligt sind. Die FOXI1-abhängige Regulation greift in entwicklungsbiologische Transkriptionsschaltkreise und Prozesse der epithelialen Reifung ein, die Gewebemusterung und funktionelle Spezialisierung prägen. Eine fehlregulierte FOXI1-Aktivität ist mit Defekten der Epithelentwicklung und Phänotypen der Ionenhandhabung assoziiert und macht FOXI1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung genregulatorischer Netzwerke, die der Organogenese und Störungen der Homöostase zugrunde liegen.

FOXI1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Foxi1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

FOXI1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Foxi1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen FOXI1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Foxi1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.