FOXF2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404367-ACT

FOXF2 (Forkhead-Box F2) ist ein menschlicher Transkriptionsfaktor aus der Forkhead-Familie, der während der Entwicklung und bei der Gewebehomöostase die mesenchymale Differenzierung, den Umbau der extrazellulären Matrix sowie die epithelial–mesenchymale Signalübertragung reguliert. Er moduliert Transkriptionsprogramme, die mit Zellmotilität, Adhäsion und dem stromal–epithelialen Crosstalk verknüpft sind, und greift dabei in Signalwege wie die TGF-β‑responsive Genregulation und weitere entwicklungsbiologische Signalnetzwerke ein. Eine veränderte FOXF2-Expression wurde in mehreren Krankheitskontexten mit fehlregulierten Differenzierungszuständen und Veränderungen in Genexpressionsprogrammen in Verbindung gebracht, die mit Invasivität zusammenhängen. Diese Eigenschaften machen FOXF2 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um die transkriptionelle Kontrolle der Linienspezifizierung und durch das Mikromilieu getriebene Phänotypen zu untersuchen.

FOXF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FOXF2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FOXF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FOXF2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FOXF2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FOXF2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FOXF2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FOXF2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FOXF2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FOXF2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.