FOXD2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-410785-LAC

FOXD2 codifica un fattore di trascrizione della famiglia forkhead box (FOX) che regola programmi di espressione genica responsabili della specificazione del destino cellulare, dell’impegno di linea e della differenziazione. In quanto proteina nucleare legante il DNA, FOXD2 dovrebbe influenzare lo stato della cromatina e le reti trascrizionali che coordinano il patterning dello sviluppo e l’omeostasi tissutale. Un’attività alterata dei fattori di trascrizione FOX è ampiamente associata a proliferazione deregolata, plasticità epitelio-mesenchimale e cambiamenti dello stato di differenziazione, rilevanti per il cancro e la biologia dello sviluppo. FOXD2 è quindi di interesse per studi sulla regolazione trascrizionale, sul controllo enhancer–promotore e sugli effetti a livello di via di segnalazione sull’identità cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale FOXD2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FOXD2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FOXD2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FOXD2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FOXD2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FOXD2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.