FOXD2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410785-ACT

FOXD2 codifica um fator de transcrição da família forkhead box (FOX) que se liga a motivos de DNA específicos de sequência para regular programas de expressão gênica envolvidos na identidade celular e no padrão do desenvolvimento. Como regulador nuclear, o FOXD2 contribui para redes transcricionais que controlam a especificação de linhagens, a diferenciação e a morfogênese tecidual por meio da modulação coordenada de genes-alvo a jusante. A desregulação do controle transcricional da família FOX é frequentemente associada à proliferação aberrante e a estados de diferenciação alterados, tornando o FOXD2 relevante para estudos de distúrbios do desenvolvimento e de circuitos de regulação gênica associados ao câncer. Assim, o FOXD2 humano é útil para investigar como a dosagem de fatores de transcrição remodela os resultados transcricionais dependentes de cromatina em sistemas modelo.

FOXD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXD2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXD2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXD2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXD2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXD2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXD2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXD2 em células tumorais com expressão de FOXD2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.