Plasmide CRISPR d'Activation (m) FOXC2: sc-420370-ACT

La protéine Forkhead box C2 (FOXC2), codée par le gène murin Foxc2, est un facteur de transcription de type « winged-helix » qui orchestre des programmes de développement et d’homéostasie tissulaire via une régulation contextuelle de l’expression génique. FOXC2 est impliquée dans le développement vasculaire et lymphatique, les décisions de destinée des cellules mésenchymateuses et des processus de type transition épithélio-mésenchymateuse, en interaction avec des voies telles que les signalisations TGF-β, Notch et Wnt qui façonnent la morphogenèse et le remodelage. Une activité altérée de FOXC2 est associée à des anomalies de la biologie lymphatique et cardiovasculaire et a été liée à une migration cellulaire et une invasivité dérégulées dans des modèles associés aux maladies. Ces propriétés font de Foxc2 un nœud utile pour étudier les réseaux transcriptionnels contrôlant la différenciation, la fonction barrière et le remodelage tissulaire.

FOXC2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Foxc2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FOXC2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Foxc2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Foxc2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FOXC2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Foxc2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FOXC2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FOXC2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Foxc2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.