FOXC2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402351-ACT

FOXC2 (forkhead box C2) ist ein menschlicher Transkriptionsfaktor der Forkhead-Familie, der während der Entwicklung und der Homöostase adulten Gewebes die Identität mesenchymaler und endothelialer Zellen programmiert. Er reguliert Gennetzwerke, die an der Lymphangiogenese, am vaskulären Remodeling, an der epithelial-mesenchymalen Transition (EMT), an der Organisation der extrazellulären Matrix sowie an der Zytoskelettdynamik beteiligt sind, und greift dabei in Signalachsen wie TGF-β, Notch und VEGF-abhängige Signalwege ein. Die FOXC2-Aktivität beeinflusst Zellmigration und Invasivität durch transkriptionelle Kontrolle von Genen für Adhäsion und Motilität; eine veränderte FOXC2-Expression wurde in mehreren Tumorkontexten mit metastatischer Progression in Verbindung gebracht. Keimbahnveränderungen von FOXC2 sind mit dem Lymphödem-Distichiasis-Syndrom assoziiert, was seine Rolle bei der Bildung lymphatischer Klappen und der lymphatischen Funktion unterstreicht.

FOXC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FOXC2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FOXC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FOXC2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FOXC2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FOXC2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FOXC2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FOXC2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FOXC2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FOXC2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.