FNBP4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408501-ACT

FNBP4 (proteína de ligação à formina 4) é um adaptador citoplasmático implicado no acoplamento da dinâmica de membranas à remodelação do citoesqueleto de actina por meio de interações com parceiros ricos em prolina e que contêm domínios SH3. Ao conectar complexos de sinalização à maquinaria endocítica e do citoesqueleto, a FNBP4 pode influenciar o tráfego vesicular, alterações na forma celular e programas de migração. A regulação alterada desses processos é frequentemente associada a fenótipos de crescimento e invasão desregulados, tornando a FNBP4 um nó relevante para estudar o “rewiring” de vias em câncer e outros distúrbios que envolvem controlo aberrante do citoesqueleto. A investigação funcional de FNBP4 apoia estudos mecanísticos de sinalização dependente de actina, tráfego de membranas e resultados transcricionais específicos do contexto impulsionados por essas vias.

FNBP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FNBP4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FNBP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FNBP4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FNBP4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FNBP4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FNBP4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FNBP4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FNBP4 em células tumorais com expressão de FNBP4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.