Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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FMR1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401919-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FMR1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FMR1 Double-Nickase-Plasmid (h) und FMR1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FMR1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FMR1: sc-101048
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FMR1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401919-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FMR1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401919-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FMR1 kodiert das Fragile-X-Mental-Retardation-Protein (FMRP), ein RNA-bindendes Protein, das den Transport, die Stabilität und die Translation von mRNAs reguliert, insbesondere an neuronalen Synapsen. FMRP assoziiert mit Polyribosomen und Ribonukleoprotein-Granula, um die aktivitätsabhängige lokale Proteinsynthese zu modulieren, und unterstützt damit die synaptische Entwicklung, Plastizität und die Reifung dendritischer Dornen. Über die Kontrolle signalverknüpfter Translationsprogramme greift FMR1 in Signalwege ein, die an synaptischer Funktion und neuronaler Differenzierung beteiligt sind. Ein Verlust oder eine Fehlregulation der FMR1-Expression ist stark mit Fragile-X-assoziierten neuroentwicklungsbedingten Phänotypen verbunden und macht FMR1 zu einem zentralen Ziel für mechanistische Studien des RNA-Stoffwechsels und der Synapsenbiologie.
FMR1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FMR1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FMR1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FMR1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FMR1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.