Plasmide CRISPR d'Activation (h) FMO3: sc-406605-ACT

La FMO3 humaine (flavin-containing monooxygenase 3) est une monooxygénase dépendante du FAD, localisée dans le réticulum endoplasmique, qui catalyse des réactions de N‑oxygénation et de S‑oxygénation sur des amines xénobiotiques et endogènes, contribuant ainsi à l’élimination métabolique de phase I. Elle joue un rôle central dans le métabolisme oxydatif hépatique et s’inscrit dans des réseaux plus larges de détoxification, en coordination avec les enzymes CYP, les voies de conjugaison et l’homéostasie redox cellulaire. Une expression ou une activité altérée de FMO3 peut modifier les profils de métabolites, notamment la conversion de la triméthylamine (TMA) en N‑oxyde de triméthylamine (TMAO), avec des répercussions en aval sur la signalisation métabolique et inflammatoire. Les variations génétiques de FMO3 sont associées à la triméthylaminurie et sont fréquemment exploitées dans les études portant sur les différences interindividuelles de métabolisme des médicaments et de sensibilité aux substances chimiques.

FMO3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FMO3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FMO3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FMO3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FMO3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FMO3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FMO3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FMO3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FMO3 dans les cellules tumorales présentant une expression de FMO3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.