FMNL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406244

Übersicht

FMNL3 (formin-like protein 3) ist ein durch Rho-GTPasen regulierter Faktor für die Nukleation und Elongation von Aktinfilamenten, der den Umbau des kortikalen Aktinzytoskeletts koordiniert. Es unterstützt die Bildung von Filopodien und Lamellipodien, reguliert die Zellpolarität und trägt über mit der CDC42/RAC-Signalübertragung und der Zytoskelettdynamik verknüpfte Wege zur gerichteten Migration bei. Die FMNL3-Aktivität beeinflusst Membranprotrusionen, den Turnover von Adhäsionen sowie intrazelluläre Transportprozesse, die von der Aktinassemblierung abhängen. Eine fehlregulierte FMNL3-Expression oder -Signalübertragung wurde in mehreren Modellsystemen mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Tumorzellinvasion und Metastasierung relevant sind, was FMNL3 zu einem geeigneten Ziel für mechanistische Studien zu Motilität und zytoskelettaler Kontrolle macht.

Das FMNL3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FMNL3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FMNL3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FMNL3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FMNL3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FMNL3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FMNL3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FMNL3-Exone abzielen, die für die FMNL3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FMNL3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FMNL3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FMNL3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FMNL3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FMNL3 HDR-Plasmid (h) und FMNL3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FMNL3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FMNL3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.