FLJ23356 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406964

Übersicht

POMK (Protein-O-Mannose-Kinase), auch als FLJ23356 bezeichnet, kodiert eine im Golgi-Apparat lokalisierte Kinase, die für die Phosphorylierung von O‑Mannose auf α‑Dystroglykan erforderlich ist – ein entscheidender Schritt der Glykanreifung, der die Bindung an die extrazelluläre Matrix unterstützt. Diese Aktivität ist Teil des O‑Mannosylierungs- und dystroglykanopathiebezogenen Glykosylierungsnetzwerks und überschneidet sich mit Signalwegen, die die Organisation der Basalmembran, Zelladhäsion sowie die Integrität von Muskel- und Hirngewebe steuern. Eine Störung der POMK-abhängigen Glykosylierung beeinträchtigt die Ligandeninteraktionen von α‑Dystroglykan und verändert membranassoziierte Signalkomplexe. Genetische Defekte in POMK sind mit Dystroglykanopathien und Phänotypen kongenitaler Muskeldystrophien assoziiert, was das Gen zu einem geeigneten Lokus für die Modellierung glykosylierungsbedingter Krankheitsmechanismen macht.

Das FLJ23356 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des POMK-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des POMK-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von POMK nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FLJ23356-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von POMK-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FLJ23356-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf POMK-Exone abzielen, die für die FLJ23356-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere POMK-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FLJ23356 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FLJ23356 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des POMK-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FLJ23356 HDR-Plasmid (h) und FLJ23356 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von POMK-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten POMK-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.