Plásmido Doble Nickase (h) Flightless I: sc-401667-NIC

FLII codifica Flightless I, una proteína remodeladora de actina de la familia gelsolina, conservada evolutivamente, que coordina la dinámica del citoesqueleto con la regulación transcripcional. Flightless I participa en la migración celular, la adhesión y los programas de respuesta a heridas mediante la modulación de la arquitectura de actina y sus interacciones con redes de señalización como las vías dependientes de las GTPasas Rho y los procesos asociados a las adhesiones focales. En el núcleo, puede influir en complejos asociados a la cromatina y en los resultados transcripcionales que moldean la expresión génica inflamatoria y sensible al estrés. En la literatura, la actividad desregulada de FLII se ha vinculado con alteraciones en la reparación epitelial, fenotipos de señalización inmunitaria y la motilidad celular asociada a tumores, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de la comunicación del citoesqueleto al núcleo.

Flightless I El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FLII en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FLII. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FLII. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FLII alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.