FLG/Filaggrin Double Nickase Plasmid (h): sc-400644-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FLG/Filaggrin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FLG/Filaggrin Double-Nickase-Plasmid (h) und FLG/Filaggrin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FLG abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FLG/Filaggrin: sc-66192
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FLG/Filaggrin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400644-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FLG/Filaggrin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400644-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FLG kodiert Filaggrin, ein zentrales Strukturprotein, das in differenzierenden Keratinozyten zunächst als Profilaggrin gebildet und anschließend proteolytisch zu Filaggrin-Monomeren verarbeitet wird, die Keratin-Intermediärfilamente aggregieren. Diese Funktion unterstützt die terminale epidermale Differenzierung, die Verdichtung der Korneozyten und die Ausbildung der Barriere des Stratum corneum; zudem tragen weitere Abbauprodukte zur Bildung natürlicher Feuchthaltefaktoren (Natural Moisturizing Factors, NMF) bei, die die Hydratation und den pH-Wert der Hautoberfläche regulieren. Die FLG-Aktivität ist in Programme der Keratinisierung und der Bildung der cornifizierten Hülle eingebettet, die nachgeschaltet zu Signalnetzwerken der epidermalen Differenzierung ablaufen. Genetische Varianten oder eine verminderte Filaggrin-Expression sind stark mit Phänotypen der Barrierestörung und einer erhöhten Anfälligkeit für entzündliche Hauterkrankungen assoziiert, weshalb FLG in Studien zur epithelialen Homöostase und zu Mechanismen kutaner Entzündung häufig im Fokus steht.
FLG/Filaggrin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FLG-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FLG abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FLG-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FLG-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.