FLG/Filaggrin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400644

Übersicht

FLG kodiert Filaggrin, ein zentrales Protein der epidermalen Differenzierung, das in Keratohyalin-Granula zunächst als Profilaggrin gebildet und anschließend zu Filaggrin-Repeats prozessiert wird, die während der terminalen Keratinozytenreifung Keratin-Intermediärfilamente aggregieren. Abbauprodukte von Filaggrin tragen zum natürlichen Feuchthaltefaktor (Natural Moisturizing Factor, NMF) bei und unterstützen die Hydratation des Stratum corneum, die pH-Homöostase und die Integrität der Hautbarriere. Über diese Funktionen ist FLG mit der Bildung der cornified envelope (verhornten Hülle), der Lipidorganisation und entzündlichen Signalwegen verknüpft, die mit Barrierestress in Zusammenhang stehen. Loss-of-function-Varianten oder eine verringerte Expression sind mit Phänotypen einer beeinträchtigten Hautbarriere assoziiert und werden häufig in Modellen der atopischen Dermatitis und Ichthyosis vulgaris untersucht.

Das FLG/Filaggrin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FLG-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FLG-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FLG nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FLG/Filaggrin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FLG-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FLG/Filaggrin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FLG-Exone abzielen, die für die FLG/Filaggrin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FLG-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FLG/Filaggrin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FLG/Filaggrin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FLG-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FLG/Filaggrin HDR-Plasmid (h) und FLG/Filaggrin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FLG-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FLG-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.