Plasmide Double Nickase (m) FLAD1: sc-435691-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) FLAD1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FLAD1 Double Nickase (m) et le plasmide FLAD1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Flad1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FLAD1 Antibody (G-4): sc-376819
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) FLAD1 | sc-435691-NIC | 20 µg | $410.00 |
Flad1 code la flavine adénine dinucléotide synthétase 1 (FLAD1), une enzyme clé qui convertit la FMN en FAD, contrôlant ainsi le pool cellulaire de ce cofacteur rédox essentiel. En régulant les oxydoréductases dépendantes de la FAD, FLAD1 soutient le métabolisme mitochondrial et peroxysomal, la phosphorylation oxydative et, plus largement, les voies médiées par les flavoprotéines qui influencent l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène. Une biosynthèse altérée des cofacteurs flaviniques est associée à des défauts du métabolisme énergétique et des réponses au stress cellulaire, ce qui fait de Flad1 un nœud pertinent pour étudier la vulnérabilité métabolique et le déséquilibre rédox. Dans les modèles murins, la perturbation de Flad1 constitue une approche aisément exploitable pour interroger, à l’échelle des tissus, les réseaux de signalisation et d’enzymes dépendants des cofacteurs.
FLAD1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Flad1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Flad1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Flad1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Flad1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.