FLAD1 Double Nickase Plasmid (m): sc-435691-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FLAD1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FLAD1 Double-Nickase-Plasmid (m) und FLAD1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Flad1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FLAD1: sc-376819
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FLAD1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-435691-NIC | 20 µg | $410.00 |
Flad1 kodiert die Flavin-Adenin-Dinukleotid-Synthetase 1 (FLAD1), ein Schlüsselenzym, das FMN in FAD umwandelt und damit den zellulären Pool dieses essenziellen Redox-Kofaktors steuert. Durch die Regulation FAD-abhängiger Oxidoreduktasen unterstützt FLAD1 den mitochondrialen und peroxisomalen Stoffwechsel, die oxidative Phosphorylierung sowie weitere flavoproteinvermittelte Signal- und Stoffwechselwege, die die Homöostase reaktiver Sauerstoffspezies beeinflussen. Eine veränderte Biosynthese von Flavin-Kofaktoren ist mit Störungen des Energiestoffwechsels und zellulären Stressantworten verknüpft, wodurch Flad1 ein relevanter Ansatzpunkt für die Untersuchung metabolischer Verwundbarkeit und von Redox-Ungleichgewichten ist. In Mausmodellen bietet die Perturbation von Flad1 einen gut handhabbaren Ansatz, um kofaktorabhängige Signalwege und Enzymnetzwerke gewebsübergreifend zu analysieren.
FLAD1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Flad1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Flad1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Flad1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Flad1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.