FLAD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406725

Übersicht

FLAD1 kodiert die Flavin-Adenin-Dinukleotid-Synthetase 1, ein bifunktionales Enzym, das die Adenylierung von FMN katalysiert und dadurch FAD erzeugt – einen zentralen Redox-Kofaktor, der von zahlreichen mitochondrialen und zytosolischen Flavoproteinen benötigt wird. Indem FLAD1 die zelluläre FAD-Verfügbarkeit steuert, unterstützt es den oxidativen Stoffwechsel, Elektronentransferreaktionen, die β‑Oxidation von Fettsäuren sowie die allgemeine mitochondriale Homöostase und verknüpft damit den aus Mikronährstoffen stammenden Riboflavinstoffwechsel mit Energiegewinnung und Redoxgleichgewicht. Störungen der FAD-Synthese können flavoproteinabhängige Signal- und Stoffwechselwege beeinträchtigen, den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies verändern und die bioenergetische Leistungsfähigkeit mindern. Genetische und funktionelle Befunde beim Menschen bringen eine FLAD1-Dysfunktion mit angeborenen Störungen des Flavinstoffwechsels und mit Phänotypen mitochondrialer Erkrankungen in Verbindung, wodurch FLAD1 für Studien zu metabolischem Stress und mitochondrialer Biologie relevant ist.

Das FLAD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FLAD1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FLAD1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FLAD1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FLAD1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FLAD1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FLAD1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FLAD1-Exone abzielen, die für die FLAD1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FLAD1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FLAD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FLAD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FLAD1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FLAD1 HDR-Plasmid (h) und FLAD1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FLAD1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FLAD1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.