Plasmide CRISPR/Cas9 KO FKSG80 (m): sc-433960

Présentation

Hcar1 code un récepteur couplé aux protéines G sensible au lactate, impliqué dans le couplage entre la disponibilité extracellulaire de lactate et des programmes de signalisation intracellulaire qui régulent le métabolisme cellulaire et la modulation immunitaire dans les tissus de souris. L’activation du récepteur est associée à une suppression de l’AMPc dépendante de Gi/o et à des effets en aval sur la signalisation MAPK, les réponses transcriptionnelles et le remodelage métabolique en conditions d’hypoxie ou de fort flux glycolytique. En raison de son rôle dans la signalisation du lactate, Hcar1 est étudié dans des contextes d’inflammation, de neurobiologie, de physiologie du tissu adipeux et du muscle, ainsi que de microenvironnements associés aux tumeurs où des gradients de lactate modèlent le comportement cellulaire. Une dérégulation de la signalisation via ce récepteur du lactate est donc pertinente pour des voies qui coordonnent l’homéostasie énergétique et l’adaptation au stress à travers de multiples systèmes d’organes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FKSG80 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hcar1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hcar1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hcar1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FKSG80.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hcar1 pour l'étude de la signalisation de FKSG80, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hcar1 essentiels à la fonction de FKSG80
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hcar1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FKSG80 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FKSG80 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hcar1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FKSG80 plasmide HDR (m) et le FKSG80 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hcar1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hcar1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.