FKHRL1/FOXO3a Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400308-NIC

FOXO3 (FKHRL1/FOXO3a) codifica um fator de transcrição da família forkhead box O que integra sinais de fatores de crescimento e de nutrientes para regular o controle do ciclo celular, a resistência ao estresse oxidativo, a autofagia e a apoptose. A atividade de FOXO3 é rigidamente controlada por modificações pós-traducionais, incluindo a fosforilação mediada por AKT a jusante da via PI3K–AKT, que promove o sequestro citoplasmático, e sinais ativados por estresse, como AMPK e JNK, que favorecem a localização nuclear e a atividade transcricional. Por meio da regulação de alvos envolvidos em metabolismo, respostas a danos no DNA e proteostase, FOXO3 contribui para a homeostase celular em múltiplas linhagens. A desregulação da sinalização de FOXO3 tem sido associada a alterações na tolerância ao estresse e em programas de sobrevivência relevantes para a biologia do câncer, neurodegeneração, disfunção metabólica e regulação imunológica.

FKHRL1/FOXO3a O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus FOXO3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de FOXO3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função FOXO3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com FOXO3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.