Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
FKHR/FOXO1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400137-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FKHR/FOXO1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FKHR/FOXO1 Double-Nickase-Plasmid (h) und FKHR/FOXO1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FOXO1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FKHR/FOXO1: sc-374427
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FKHR/FOXO1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400137-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FKHR/FOXO1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400137-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FOXO1 (FKHR) kodiert einen Forkhead-Box-Transkriptionsfaktor, der Insulin/IGF-1- und PI3K–AKT-Signalwege mit zellulären Programmen zur Kontrolle von Stoffwechsel, oxidativen Stressantworten, Zellzyklusarrest und Apoptose verknüpft. Eine AKT-abhängige Phosphorylierung reguliert das nukleozytoplasmatische Shuttling von FOXO1 und seine transkriptionelle Aktivität und verbindet so den Nährstoffstatus mit Genexpressionsprogrammen wie Glukoneogenese und Autophagie. FOXO1 interagiert zudem mit TGF-β/SMAD- und MAPK-Signalwegen, um Differenzierung und Gewebehomöostase zu modulieren. Eine fehlregulierte FOXO1-Aktivität oder -Lokalisation wird mit Stoffwechselstörungen und der Krebsbiologie in Verbindung gebracht; genomische Veränderungen von FOXO1, etwa Fusionsereignisse, werden genutzt, um onkogene transkriptionelle Reprogrammierung zu untersuchen.
FKHR/FOXO1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FOXO1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FOXO1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FOXO1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FOXO1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.