Plásmido Doble Nickase (h) FKBP25: sc-410783-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)FKBP25 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa FKBP25 (h) y el plásmido de doble nickasa FKBP25 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FKBP3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FKBP25 Anticuerpo (H-6): sc-374357
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) FKBP25 | sc-410783-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) FKBP25 | sc-410783-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **FKBP3** codifica **FKBP25**, una inmunofilina nuclear con actividad isomerasa peptidil-prolil cis–trans que actúa como chaperona de plegamiento proteico y como andamiaje en procesos asociados a la cromatina. FKBP25 interactúa con el ADN y con reguladores transcripcionales para influir en programas de expresión génica, y se ha relacionado con la regulación de la biogénesis ribosomal, las respuestas al daño del ADN y la señalización adaptativa al estrés. A través de estas actividades, FKBP25 contribuye al control de la progresión del ciclo celular y de la homeostasis proteica, vías que con frecuencia se ven alteradas en contextos de enfermedades proliferativas y neurodegenerativas. Se han descrito cambios en la expresión o la localización de FKBP3/FKBP25 en múltiples escenarios relevantes para la enfermedad, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudiar el control de calidad de proteínas nucleares y la regulación transcripcional.
FKBP25 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FKBP3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FKBP3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FKBP3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FKBP3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.