Fibulin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432105

概要

Efemp1は、分泌型の細胞外マトリックス（ECM）糖タンパク質であるフィブリン-3をコードしており、弾性線維や基底膜成分と結合して、マトリックスの組織化、細胞接着、ならびに組織の力学的特性（バイオメカニクス）の制御に関与します。フィブリン-3は、メタロプロテアーゼおよびその阻害因子との相互作用を介してECMリモデリングに影響を与え、タンパク質恒常性（プロテオスタシス）や、血管新生・細胞遊走に影響するシグナルの手掛かりを形成します。マウス組織では、Efemp1は結合組織および血管の恒常性維持に寄与し、その制御が破綻すると変性や線維化に関連する表現型が生じることが示されています。これらの特性により、Efemp1は発生、加齢、炎症に伴うリモデリングにおけるECM駆動性経路を解明するための有用な標的となります。

Fibulin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEfemp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Efemp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Efemp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Fibulin-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Fibulin-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Efemp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Fibulin-3の機能に不可欠なEfemp1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Efemp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Fibulin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFibulin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Efemp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Fibulin-3 HDRプラスミド（m）および Fibulin-3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEfemp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEfemp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。