Fibronectin Lentiviral Activation Particles (h): sc-400082-LAC

FN1 kodiert Fibronectin, ein hochmolekulares Glykoprotein der extrazellulären Matrix, das sich zu fibrillären Netzwerken zusammenlagert und über die Bindung an Integrine Zelladhäsion, Migration und Mechanotransduktion vermittelt. Fibronectin koordiniert die Organisation der extrazellulären Matrix, die Dynamik fokaler Adhäsionen und den Umbau des Zytoskeletts und beeinflusst dabei Signalwege wie die Integrin–FAK/SRC-Signalkaskade, die Regulation von Rho‑GTPasen und das TGF‑β‑assoziierte Matrix-Remodeling. Als zentraler Bestandteil der Wundheilung und der Gewebehomöostase trägt Fibronectin zur epithelial‑mesenchymalen Transition, zu angiogenen Programmen und zu Interaktionen mit dem Stroma bei. Eine dysregulierte FN1-Expression und veränderte Ablagerung der Fibronectin-Matrix werden mit fibrotischem Umbau, entzündlichen Mikroumgebungen und dem Tumor–Stroma‑Crosstalk in Verbindung gebracht, die für metastaseassoziierte Phänotypen relevant sind.

Fibronectin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente FN1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Fibronectin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der FN1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Fibronectin-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen FN1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.