Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Fibronectin Double Nickase Plasmid (h): sc-400082-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Fibronectin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Fibronectin Double-Nickase-Plasmid (h) und Fibronectin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FN1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Fibronectin: sc-8422
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Fibronectin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400082-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Fibronectin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400082-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FN1 kodiert Fibronectin, ein hochmolekulares Glykoprotein der extrazellulären Matrix (EZM), das sich zu fibrillären Netzwerken zusammenlagert und Integrin-Bindungsstellen bereitstellt, um Zelladhäsion, Ausbreitung und Migration zu koordinieren. Fibronectin reguliert fokale Adhäsionen und die Zytoskelettdynamik und ist mit EZM-Remodeling‑Signalwegen verknüpft, an denen Integrine, FAK/Src‑Signalgebung und GTPasen der Rho‑Familie beteiligt sind, wodurch es Mechanotransduktion und Gewebearchitektur mitprägt. Aufgrund seiner Funktionen in der Wundheilung, Angiogenese und epithelial–mesenchymalen Interaktionen wird FN1 häufig in Zusammenhängen wie Fibrose, tumorassoziiertem Stroma und entzündlichem Gewebeumbau untersucht. Veränderte Fibronectin-Ablagerung und ein verschobenes Gleichgewicht der Spleißisoformen stehen in mehreren Krankheitsmodellen mit Veränderungen der Zellinvasion, der Migration von Immunzellen und organspezifischer Matrixsteifigkeit in Zusammenhang.
Fibronectin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FN1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FN1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FN1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FN1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.